养培，细胞培养的主要条件和注意事项以及使用的试剂

本文目录一览

1，细胞培养的主要条件和注意事项以及使用的试剂
2，细胞培养的注意事项
3，细胞培养的方法有哪些
4，植物细胞与组织培养的基本过程包括哪些步骤
5，细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项
6，植物细胞培养需要什么样的培养条件

1，细胞培养的主要条件和注意事项以及使用的试剂

要做细胞培养的话，硬件条件包括：细胞室（最好带空气净化系统），超净工作台，培养箱，离心机，冰箱，显微镜（倒置），常规培养耗材及移液枪等。操作原则：无菌（最基本的），培养环境的稳定（温湿度保持恒定，不轻易改变培养基及添加物等，传代换液时操作要快，尽可能缩短在培养箱外的操作时间）使用的试剂有：培养基，PBS，传代用消化液，血清，抗生素（青链霉素），培养用添加物（非必需氨基酸，细胞生长因子等）

细胞培养的主要条件和注意事项以及使用的试剂

2，细胞培养的注意事项

原代动物细胞培养：1、实验材料要新鲜，从活体分离材料后要低温保存，并尽快进行细胞分离实验。2、无菌操作。操作时用的培养液，可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。3、用酶法分离细胞时，注意酶液的浓度和控制消化时间。贴块法分离细胞时，注意动作要轻柔，不要伤到细胞组织，组织块边缘尽量平整有利于细胞游离。4、培养液的选择。不同的细胞有对培养液中营养的要求不同，根据所分离细胞的特性选择。传代细胞培养：1、无菌操作2、控制消化时间3、及时关注细胞生长状态

很好培养啊……你是想问这种细胞特殊的培养需要还是只是指培养细胞应注意的事项呀？就，正常操作就是，不要啥东西都用火烧一下。。。手不要碰任何瓶口，不要碰微量移液枪的插枪头的位置，手、胳膊不要从开口的东西上面经过，如果是用细胞培养瓶培养，放入培养箱速度快一点，别打开这培养箱的门，瓶盖不用拧得很松。如果是新手操作一定要戴无菌手套，培养液里一定要加抗生素，一般不太会污染。其它的就只能具体问题具体分析了……总之这个细胞株我觉得很好养，不用担心。

首先无菌是最重要的，而且温度要适宜。温度是以什么种类的细胞来确定的，各种细胞所适宜的温度都是不一样的。培养液的酸碱度也是一个重要的因素，培养液必须酸碱度适合细胞生长且包含细胞生长的全部营养，且温度适度，酶的浓度也要把握好。

细胞培养的注意事项

3，细胞培养的方法有哪些

轻轻吹打,可先离心（1000rpm. 2,如要高浓度或需更换新培养基,新鲜培养基重悬沉淀,置培养瓶内轻轻摇晃: 1,吸的越干净越好,(根据配制强度经验),镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后. 一,然后收集离心（1000rpm 5min左右）,50ml培养瓶加入消化液约0；也可复苏当时离心（1000rpm 5min左右）后,以免中和后加入的消化液,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落.在无菌台内将完全培养基加入培养瓶内,然后继续进行传代、传代培养首先进行细胞复苏,使细胞基本成单个悬浮,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞细胞培养首先分为原代培养和传代培养、冻存,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化,晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟,24h后换液.贴壁细胞.6ml,加入完全培养基继续培养、原代培养需要从组织中消化,去除血清和死细胞,轻轻吹匀后.悬浮细胞,加入完全培养基后继续培养或实验: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,加入2-3ml完全培养基后,适时换液,按此比例进行消化.PBS清洗2-3次,使强度减弱,使细胞均匀后置培养箱内培养: 1,5min左右）后加入完全培养基,完全培养基重悬培养. 2.先将水温锅调至37-38度.应遵守慢冻快融的原则；二、纯化出单细胞、分离. 细胞传代: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养

细胞培养的方法有哪些

4，植物细胞与组织培养的基本过程包括哪些步骤

植物组织培养包括2个过程，脱分化和再分化。 1.外植体（被培养的组织块--叶片碎片、茎尖、幼胚等或细胞--去壁的叶肉细胞）细胞恢复分裂，形成大量的细胞--愈伤。这个过程是脱分化。由于是已经成熟的细胞脱离了成熟细胞的状态，回到类似胚胎阶段的状态，故称脱分化。 2.愈伤组织的细胞经过诱导，分化形成根、茎、叶等器官甚至形成类似种子中的胚一样的结构--胚状体（体胚），这个过程就是再分化。

植物组织培养的基本流程为：离体的植物器官、组织或细胞(外植体)—脱分化形成愈伤组织—再分化形成根、芽等器官—长成植物体。 1. 植物细胞的脱分化。离体的植物组织或细胞，在培养了一段时间以后，会通过细胞分裂，形成愈伤组织。愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化，又叫做去分化。 2. 植物细胞的再分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。外植体的遗传特征、取材的位置都会影响愈伤组织的再分化能力。培养基的成分和物理性质也会对器官的发生有一定的影响，但主要决定因素是植物激素，特别是生长素和细胞分裂素的配比。 3. 试管苗的移植。再分化形成的试管苗，移栽到地里，就可以发育成完整的植物体。

5，细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项

一、复苏 1. 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。 2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。 3. 把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。 4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。 5. 3天换一次培养基。二、传代 1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。 2. 把原有培养基吸掉。 3. 加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化1-2分钟。 4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。 5. 用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。 6. 把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。 7. 倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。 8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。三、冻存把细胞消化下来并离心（同上）。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。冻存液的配制： 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。要注意的就是无菌操作！

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6，植物细胞培养需要什么样的培养条件

植物细胞培养条件温度：培养温度对植物细胞生长及二次代谢产物生成有重要影响。通常，植物细胞培养采用25℃。搅拌：在摇瓶实验中，通常摇床的转速取90―120r／min。 pH值：通过细胞膜进行的H+离子传递对细胞的生育环境、生理活性来说无疑是重要的。在培养过程中，通常pH作为一个重要参数被控制在一定范围内。植物细胞培养的适宜pH值一般为5―6。通气：通气是细胞液体深层培养重要的物理化学因子。好气培养系统的通气与混合及搅拌是相互关联的。对摇瓶试验，通常500m1的三角瓶内装 80―200m1的植物细胞培养液较适宜。当然，气液传质还与瓶塞的材料有关。试验表明，从溶氧速率考虑，以棉花塞最好，微孔硅橡胶塞次之，铝箔塞最差。光：光对植物有着特殊的作用。光照射条件不仅通过光照周期、光的质量(即种类、波长)而且通过光照量(光强度)的调节来影响植物细胞的生理特性和培养特性。研究表明，光调节着细胞中的关键酶的活性，有时光能大大促进代谢产物的生成，有时却起着阻害作用。细胞龄：在培养过程的不同时期，细胞的生理状况、生长与物质生产能力差异显著。而且，使用不同细胞龄的种细胞，其后代的生长与物质生产状况也会大不一样。通常，使用处于对数生长期后期或稳定期前期的细胞作为接种细胞较合适。接种量：在植物细胞培养中，接种量也是一个影响因素。在再次培养中，往往取前次培养液的5―20％作为种液，也以接种细胞湿重为基准，其接种浓度为 15―50g(湿细胞)／L。由于接种量对细胞产率及二次代谢物质的生产有一定影响，故应根据不同的培养对象通过试验，确定其最大接种量。 ……………… 详细资料请参考：on http://www.bio1000.com/zt/cell/201378.html

必须是离体器官。当然，那些什么水，无机盐等营养成分，还有适宜的生长环境是必须的

(1)光照(2)激素（3）营养,也就是培养基